Kurzfassung

Ziel dieses Projekts ist, die Funktion der durch das Tet3-Protein vermittelten Oxidation von 5-Methylcytosin (5mC) zu 5-Hydroxymethylcytosin (5hmC) während der frühen Maus-Entwicklung weiter zu charakterisieren und dabei insbesondere den möglichen Einfluss von künstlichen Reproduktionsverfahren (ARTs) auf diesen Prozess aufzuklären. Dabei wollen wir zunächst Whole-Mount-Immunofluoreszenzfärbungen mit spezifischen Antikörpern durchführen, um die Menge und Lokalisationsmuster von 5mC und 5hmC...Ziel dieses Projekts ist, die Funktion der durch das Tet3-Protein vermittelten Oxidation von 5-Methylcytosin (5mC) zu 5-Hydroxymethylcytosin (5hmC) während der frühen Maus-Entwicklung weiter zu charakterisieren und dabei insbesondere den möglichen Einfluss von künstlichen Reproduktionsverfahren (ARTs) auf diesen Prozess aufzuklären. Dabei wollen wir zunächst Whole-Mount-Immunofluoreszenzfärbungen mit spezifischen Antikörpern durchführen, um die Menge und Lokalisationsmuster von 5mC und 5hmC in Zygoten und frühen Embryonen nach in vitro- oder in vivo-Fertilisation bzw. nach Superovulation oder normaler Ovulation zu bestimmen und vergleichen. Zudem wollen wir mögliche Tet3-Zielgene mittels RNAi-Knockdown oder Überexpression von Tet3 in Zygoten und anschließende Next Generation Sequencing (NGS)-basierte RNA-Sequenzierung von Zygoten und frühen Embryonen identifizieren. Darüber hinaus wollen wir Techniken verbessern und optimieren, die mittelfristig eine ChIP-Seq (Chromatin-Immunopräzipitation und anschließendes NGS) mit einem Antikörper gegen Tet3 bzw. ein NGS-basiertes genomweites Profiling von 5hmC in Pools von Zygoten und frühen Embryonen erlauben (gefördert durch International PhD Programme “Dynamics of Gene Regulation, Epigenetics and DNA Damage Response“ der Boehringer Ingelheim-Stiftung).» weiterlesen» einklappen