Kurzfassung

Die Wachstumsfaktoren Hepatocyte Growth Factor (HGF) und Epidermal Growth Factor (EGF) sind wichtige anti-apoptotisches Zytokine in der Leber. In eigenen Vorarbeiten konnten inhibitorische Effekte von HGF auf die Todesrezeptor-vermittelte Apoptose von primären humanen Hepatozyten (PHH) nachgewiesen werden. Ziel des Projektes war es, Erkenntnisse zur Bildung und Sekretion von HGF in der Leber, insbesondere in humanen und murinen Kupffer-Zellen (KC), zu gewinnen. Geplant war für das Projekt...Die Wachstumsfaktoren Hepatocyte Growth Factor (HGF) und Epidermal Growth Factor (EGF) sind wichtige anti-apoptotisches Zytokine in der Leber. In eigenen Vorarbeiten konnten inhibitorische Effekte von HGF auf die Todesrezeptor-vermittelte Apoptose von primären humanen Hepatozyten (PHH) nachgewiesen werden. Ziel des Projektes war es, Erkenntnisse zur Bildung und Sekretion von HGF in der Leber, insbesondere in humanen und murinen Kupffer-Zellen (KC), zu gewinnen. Geplant war für das Projekt zunächst die Isolation und Kultivierung von humanen KC der Leber. Zu diesem Zweck wurden aus humanen Leberresektionsmaterial mittels Dichtegradientenzentrifugation Hepatozyten sedimentiert und aus dem verbliebenen Überstand Nicht-Parenchymzellen über die Einstellung unterschiedlicher Flussraten in einer Elutriationszentrifuge weiter aufgetrennt. Trotz vielversprechender Vorarbeiten und intensivem Austausch mit erfahrenen Kooperationspartnern gelang es nicht, mit der uns zur Verfügung stehenden Elutriationszentrifuge Kupffer-Zellen in adäquatem Umfang zu gewinnen. Auch die daraufhin intensivierten Isolationsversuche an murinen Lebern führten zur Gewinnung nur kleiner Kupffer-Zell-Populationen, die aufgrund einer nicht reparablen Leckage am Schlauchsystem der Zentrifuge innerhalb kurzer Zeit kontaminiert waren. Es wurde aus Kostengründen darauf verzichtet, auf alternative Isolationsmethoden auszuweichen. Stattdessen fokussierten wir uns wie im Antrag beschrieben auf HGF- und EGF-abhängige Signalwege in humanen Hepatozyten und Hepatomzellinien unter besonderer Berücksichtigung des Transkriptionsfaktors Early Growth Response-1 (Egr-1). Egr-1 ist ein für die Leberregeneration bedeutsamer Faktor und wird von u.a. von Wachstumsfaktoren reguliert. Wir konnten zeigen, dass Egr-1 in verschiedenen Hepatomzelllinien sowohl durch HGF als auch durch EGF über eine Aktivierung des MEK1/Erk-Signalweges induziert wird. Eine Blockade von MEK1 verhinderte vollständig die HGF- und EGF-induzierte Egr-1-Expression. In PHH war die Induktion von Egr-1 zusätzlich von einer Aktivierung des PI3K/Akt-Signalweges abhängig. Im Rahmen von cDNA-Microarrays an primären humanen Hepatozyten konnten zahlreiche weitere Zielgene von HGF und EGF identifiziert werden. Die Erkenntnisse führten zur Initiation weiterer Forschungsprojekte mit dem Ziel, Apoptosesignalwege in Hepatozyten und hepatozellären Karzinomzellen besser zu verstehen und diese möglicherweise therapeutisch beeinflussen zu können.» weiterlesen» einklappen